محیط کشت میکروبی (Orange Serum Agar (OSA که به نام محیط کشت آگار داری سرم پرتقال نیز شناخته می‌شود، برای جداسازی کشت و شمارش میکروارگانیسم‌های فاسدکننده مقاوم به اسید در آب‌میوه و کنسانتره‌های آب‌میوه، به‌ویژه از میوه‌های مرکبات استفاده می‌شود. آگار آماده شده ممکن است بعد از اتوکلاو شدن به دلیل عصاره نارنجی کدر باشد. محیط Orange-serum Agar برای تهیه سرم نارنجی اصلاح شده (MOS) به‌عنوان یک محیط برای Hymenoscephus fraxineus مورداستفاده قرار گرفته است.

از این گروه از موجودات، باکتری‌های اسیدلاکتیک در فاسد شدن نقش دارند و این‌گونه‌ها به‌عنوان Lactobacillus plantarum، Lactobacillus brevis، Leuconostoc mesenteroides و Leuconostoc dextranicum شناخته شده‌اند. در مطالعات تطبیقی انجام شده توسط Murdock و همکاران سرم آگار نارنجی در مقایسه با سایر محیط‌های مورداستفاده برای شمارش کلی و تشخیص موجودات فاسد، بهترین محیط است.

آماده‌سازی محیط OSA

• ۴۲ گرم از محیط را در ۱ لیتر آب مقطر حل کنید.
• در صورت نیاز کمی حرارت دهید تا حل شود.
• در دمای ۱۱۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه اتوکلاو کنید. از حرارت دادن بیش از حد محیط خودداری کنید.

فرآیند آزمایش محیط کشت آگار داری سرم پرتقال

• برای شمارش کلی میکروارگانیسم‌های مقاوم به اسید به روش پور پلیت، نمونه را ۱۰ برابر رقیق کنید و مقدار ۱ میلی‌لیتر از آن را داخل پلیت بریزید.
• مقدار ۲۰-۱۵ میلی­لیتر از محیط کشت خنک شده (۵۰-۴۵ درجه سانتی‌گراد) را به پلیت اضافه کنید.
• پلیت را به‌آهستگی بچرخانید تا محیط و نمونه به‌خوبی با هم مخلوط شوند.
• پلیت‌ها را در دمای ۲±۳۰ به مدت ۵-۳ روز گرماگذاری کنید.

نتیجه و تفسیر محیط کشت آگار داری سرم پرتقال

پس از گرماگذاری، پلیت‌ها را از نظر تعداد و مورفولوژی کلنی‌ها بررسی کنید. ازآنجاکه محیط کشت Orange Serum Agar محیطی افتراقی نیست، برای شناسایی گونه و جنس دقیق باکتری‌ها باید بررسی میکروسکوپی و آزمایش‌های بیوشیمیایی انجام شود.

نکات تکمیلی محیط کشت آگار داری سرم پرتقال

• از حرارت دادن بیش از حد این محیط خودداری کنید؛ زیرا منجر به تیره شدن رنگ و کاهش خاصیت جامد شدگی آن می‌شود.
• پودر محیط داخل قوطی کاملاً دربسته و در دمای زیر ۳۰ درجه سانتی‌گراد و محیط آماده در دمای ۸-۲ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود. بهترین زمان استفاده تا قبل از تاریخ انقضای درج شده بر روی برچسب محصول است.

کنترل کیفی محیط کشت OSA 

• ظاهر محیط دهیدراته: کرم/زردرنگ، پودری و یکنواخت
• ظاهر محیط آماده: زرد/قهوه­ای روشن، شفاف تا کمی کدر
• نتیجه کشت باکتری، پس از گرماگذاری در دمای ۲±۳۰ به مدت ۵-۳ روز