محیط کشت فنول رد آگار – Phenol Red

محیط کشت میکروبی Phenol Red Agar, Base که به نام محیط کشت فنول رد آگار نیز شناخته می‌شود، برای مطالعه تخمیر کربوهیدرات‌های مختلف (به‌صورت جداگانه) توسط کشت خالص میکروارگانیسم‌ها طراحی شده است.

پروتئوس پپتون که هیچ یک از کربوهیدرات‌های قابل تخمیر را ندارد هم برای جلوگیری از وقوع واکنش‌های مثبت کاذب به محیط کشت Phenol Red Agar, Base افزوده می‌شود. زمانی که فنول رد آگار توسط یکسری از کربوهیدرات‌های مخصوص عرضه می‌شود، با تولید رنگ زرد که در اصل حاصل تولید اسید است می‌توان گفت در آن زمان واکنش تخمیر کربوهیدرات صورت‌گرفته و جواب مثبت است. تولید گاز هم با تشکیل حباب‌هایی در آگار که باعث بریده شدن آن می‌شود قابل تشخیص می‌باشد. پلیت‌ها یا لوله‌ها ممکن است به روش بی‌هوازی و یا هوازی انکوبه شوند که این مسئله به نوع تست میکروارگانیسم بستگی دارد. اضافه نمودن برخی از کربوهیدرات‌ها می‌تواند منجر به واکنش اسیدی شود، ازاین‌رو اضافه‌کردن سدیم هیدروکسید ۰٫۱ نرمال می‌تواند رنگ اصلی را حفظ کرده و مانع از این شود که قرمز خیلی تیره یا قهوه‌ای تولید شود.

نگه‌داری محیط کشت فنول رد آگار

در دمای زیر ۳۰ درجه سانتی‌گراد و در ظرف دربسته نگه دارید و محیط کشت را در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد آماده کنید. قبل از منقضی شدن تاریخ روی لیبل آن را مصرف نمایید.

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت 

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود .
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.