محیط کشت فنول رد براث – Phenol Red Broth

محیط کشت فنول رد براث – Phenol Red Broth به‌عنوان محیط کشت تست می‌باشد که به همراه واکنشگرهای مختلف استفاده می‌شود. در اصل کاربرد این محیط کشت برای تشخیص بیوشیمیایی میکروارگانیسم‌ها توسط تست تخمیر می‌باشد. تخمیر واکنشگرهای اضافه شده باعث می‌شود که رنگ فنول رد از قرمز به رنگ زرد درآید. هنگام آزمایش بی‌هوازی، اضافه‌کردن مقدار کمی آگار، واکنش را تثبیت می‌کند.

ترکیبات محیط کشت فنول رد براث – Phenol Red Broth

• پپتون از کازئین
• پپتون گوشتی
• سدیم کلرید فنول رد

همچنین مواد زیر هم باید اضافه شوند (گرم بر لیتر)

• واکنشگر (در صورت لزوم) – آگار

آماده‌سازی محیط کشت فنول رد براث

• در صورت لزوم ۱۵ گرم بر لیتر سوسپانسیون آماده کنید، به همراه ۰٫۵ تا ۱ گرم آگار در لیتر. سپس در لوله‌های آزمایش توزیع کنید. در دمای ۱۲۱ درجه و به مدت ۱۵ دقیقه اتوکلاو کنید. بعد از اینکه تا دمای ۶۰ درجه خنک کردید، واکنشگرهای لازم را به‌عنوان راه حلی برای فیلتر – استریلیزاسیون اضافه کنید (غلظت نهایی باید به ۵ تا ۱۰ گرم بر لیتر برسد).
• PH باید حدود ۷٫۴ و دما ۲۵ درجه سانتی‌گراد باشد.
• براث آماده شده شفاف بوده و به رنگ قرمز می‌باشد.

روش آزمایش

لوله‌ها را به‌صورت قطره‌ای با میکروارگانیسم‌های خالص که قرار است شناسایی شوند به‌صورت قطره‌ای تلقیح کنید. یکسری لوله هم که بدون هیچ واکنش گری هستند باید به‌عنوان کنترل استفاده شوند. در مورد میکروارگانیسم‌های خاص، توصیه می‌شود چند قطره سرم استریل و غیرفعال به هر لوله اضافه شود. میکروارگانیسم‌های بی‌هوازی باید در وضعیت بی‌هوازی و در محیط کشتی که حاوی آگار هستند کشت داده شوند.

انکوباسیون

تا ۱۴ روز در دمای اپتیمم انکوباسیون (معمولاً ۳۵ درجه سانتی‌گراد). به‌طورکلی ۲۴ ساعت به‌صورت هوازی.

در طول انکوبه شدن هر روز لوله‌ها را چک کنید که آیا در لوله‌های DURHAM گاز تولید شده است یا نه که در صورت تولید گاز رنگ محیط کشت از قرمز به زرد تغییر می‌یابد. درصورتی‌که فنول رد تخریب شود باید حین چک کردن لوله‌ها به‌صورت قطره‌قطره به شکل محلول ۵ % دوباره به محیط کشت اضافه شود.