محیط کشت PCA آگار – پلیت کانت

محیط کشت میکروبی PCA که همچنین به نام‌های Plate count agar (پلیت کانت آگار) و (Standard Methods Agar (SMA (استاندارد متودز اگار) نیز شناخته می‌شود و محیط رشد میکروبیولوژیکی است که معمولاً برای ارزیابی یا نظارت بر “کل” یا رشد باکتریایی زنده یک نمونه استفاده می‌شود. برای تعیین تعداد پلاک‌ها از میکروارگانیسم‌ها در مواد غذایی، آب، فاضلاب و همچنین از نمونه‌های بالینی توصیه می‌شود که توسط APHA و FDA توصیه می‌شود. تریپتون، ترکیبات نیتروژن و کربن، آمینو اسیدهای زنجیره‌ای طولانی و سایر مواد مغذی ضروری را فراهم می‌کند. کمبود ویتامین B را تأمین می‌کند. نمونه‌ها رقیق شده و رقت‌های مناسب در صفحات پتری اضافه می‌شوند. آگار استریل به این صفحات اضافه می‌شود و صفحات به‌آرامی چرخش می‌شوند تا مخلوط شدن یکنواخت نمونه با آگار را تضمین کنند. Plate Count Agar همچنین برای شمارش باکتریایی اتاق‌های استریل مناسب است.

محتویات محیط کشت PCA

• ۵% پپتون
• ۲۵% عصاره مخمر
• ۱% گلوکز
• ۵% آگار

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود .
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.