توضیحات

آنزیم پروتئیناز K یک سرین پروتئاز است و قادر به هضم کراتین (پروتئین موجود در مو) بوده و یکی از رایج ترین کاربردهای آن شکستن پروتئین ها در روندهای استخراج DNA و RNA است.بطور کلی هرجا که نیاز به یک پروتئاز عمومی باشد، این محصول گزینه مناسبی خواهد بود. پروتئیناز K در طیف گسترده ای از دما و بافر با فعالیت بهینه بین 20 تا 60 درجه سانتیگراد و pH بین 7.5 و 12.0 فعال است.

مکانیسم پروتئیناز K

این آنزیم که توسط کلسیم فعال می شود، پروتئین ها را ترجیحاً پس از اسیدهای آمینه آبگریز (آلیفاتیک، معطر و سایر اسیدهای آمینه آبگریز) هضم می کند. اگرچه یون‌های کلسیم بر فعالیت آنزیم تأثیر نمی‌گذارند، اما به پایداری آن کمک می‌کنند. اگر زمان انکوباسیون طولانی باشد و غلظت پروتئاز به اندازه کافی بالا باشد، پروتئین ها کاملاً هضم می شوند. با حذف یون های کلسیم، پایداری آنزیم کاهش می یابد، اما فعالیت پروتئولیتیک باقی می ماند. پروتئیناز K دارای دو محل اتصال برای Ca2+ است که نزدیک به مرکز فعال قرار دارند، اما مستقیماً در مکانیسم کاتالیزوری دخالت ندارند. فعالیت باقیمانده برای هضم پروتئین ها کافی است که معمولاً آماده سازی اسید نوکلئیک را آلوده می کند. بنابراین، هضم با پروتئیناز K برای خالص سازی اسیدهای نوکلئیک معمولاً در حضور EDTA (مهار آنزیم های وابسته به یون فلز مانند نوکلئازها) انجام می شود.

کاربرد پروتئیناز K

• جداسازی پلاسمید و DNA ژنومی
• جداسازی RNA
• غیرفعال کردن RNases ، DNases و آنزیم ها در واکنش ها
• حذف آنزیم ها از DNA برای بهبود راندمان کلونینگ
• تصفیه PCR
• جداسازی میتوکندری
• از بین بردن اندوتوکسین های وابسته به پروتئین های کاتیونی ، مانند لیزوزیم و ریبونوکلئاز A
• تعیین محلی سازی آنزیم بر روی غشاها
• قرار گرفتن در معرض مکان های اتصال آنتی ژن در بخش های بافت تعبیه شده با پارافین برای برچسب زدن آنتی بادی
• هضم پروتئین ها از نمونه های بافت مغزی
• محصولات پروتئیناز K
• ارتقای لیز سلول با فعال کردن یک عامل اتولیتیک باکتریایی
• تجزیه و تحلیل ساختار غشایی با اصلاح پروتئین ها و گلیکوپروتئین ها روی سطوح سلولی
• جداسازی اسیدهای نوکلئیک برای واکنشهای تقویت شده
• از بین بردن بقایای سلولی در هنگام آماده سازی بالابرهای کلونی ، و برای درمان قسمتهای بافت برای اطمینان از نفوذ پروب کارآمد

شرایط نگهداری آنزیم پروتئیناز K

• به دور از نور مستقیم خورشید و در جای خشک و خنک نگهداری گردد.

هشدار های ایمنی کار با محصول

• كنترل و نظافت روزانه سطوح كار، هود، كف آزمايشگاه و تجهيزاتي نظيـر سـانتريفيوژ ضروري است.
• پیپت کردن با دهان ممنوع میباشد, از سمپلر و یا پیپتور مناسب استفاده نمایید .
• ممکن است بعضی رنگ ها, محلول ها و پودر ها مضر و یا سرطان زا باشند در استفاده از آنها دقت کنید.
• به محتوا و محلول های الکتروفورز دست نزنید و یا بو نکیند اکثر انها برای سلامتی مضر هستند.

مطالب مرتبط

None found