محیط کشت RBC آگار – رزبنگال کلرامفنیکول

محیط کشت میکروبی (Rose Bengal chloramphenicol (RBC که به نام محیط کشت رزبنگال کلرامفنیکول نیز شناخته می شود، یک محیط کشت انتخابی می باشد. این محیط برای شمارش بسیاری از  mould ها و مخمرها در غذاهای حاوی کلروتتراسایکلین کاربرد دارد. این محیط کشت به طور معمول با کلرامفنیکول به کار می رود. RBC آگار حاوی پپتون مایکولوژیک، گلوکز، دی پتاسیم هیدروژن ارتوفسفات، منیزیم سولفات، Rose Bengal، کلرامفنیکول، آگار و آب مقطر یا آب دیونیزه می باشد.

کاربرد RBC

افزودن Rose Bengal به محیط کشت نه تنها سایز و ارتفاع کلنی های mould را محدود می کند، بلکه به شمارش هم کمک می کند، چون رنگ توسط قارچ جذب می شود. کلرامفنیکول به عنوان عاملی انتخابی به کار می رود به این صورت که از رشد بیشتر باکتری ها جلوگیری می کند. محیط کشت (Rose Bengal chloramphenicol (RBC آگار برای غذاهای پروتئینی و همچنین جایی که بیش از حد نرمال حرارت لازم است به کار می رود.

طرز تهیه کلی محیط های کشت 

1. همانطوریکه می دانید محیطهای کشت به سه دسته جامد ، نیمه جامد ، مایع تقسیم می شوند . محیطهای مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است . مثلاً حدود ( ۲/۰%) و محیط های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم وبالاخره محیط های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌ کنیم.
3. در روی این شیشه ها ترکیب محیط بطور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده ودر مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته اید اضافی نموده و آنرا کاملاً‌ حل نمائید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آنرا چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و بمدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد ، آنرا برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید.
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود .
10. سپس در حالیکه ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آنرا با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند وازتکان دادن آن خودداری نمائید.
13. پس از جامد شدن محیطهای کشت نوترینت آگار را جمع کرده ودر c37⁰ بمدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی گراد قرار می‌دهید.