توضیحات

این محلول بی رنگ حاوی مولکول های تترا متیل بنزیدین با فرمول مولکولی C16H20N2 است.TMB نوعی سوبسترا برای آنزیم HRP می باشد. تترا متیل بنزیدین یک سوبسترای کروموژنیک است،‌به این معنا که خود این ماده بی رنگ بوده، اما در حضور یک معرف خاص دچار تغییر رنگ می­شود. (در واقع در علم شیمی واژه کروموژن به یک ترکیب شیمیایی بی رنگ اطلاق می شود که می تواند با واکنش شیمیایی به ترکیبی تبدیل شود که دارای رنگ خاص و قابل ملاحظه ای می­باشد.)

کاربرد سوبسترا تثبیت شده TMB

• نامناسب برای الایزا
• وسترن بلات و دات بلات : TMB تثبیت شده، رنگ گسترش دهنده ای برای آنتی بادی های گونزوگه که با آنزیم پراکسیداز HRP واکنش داده اند، می باشد. TMB حداقل سه برابر حساس‌تر و پایدار تر از رنگ ۴-کلرو-۱-نفتول می باشد.

مکانیسم

تترا متیل بنزیدین می تواند به عنوان یک اهدا کننده هیدروژن برای کاهش پراکسید هیدروژن به آب توسط آنزیم های پراکسیداز مانند پراکسیداز هرس ردیش عمل کند. دی ایمین ایجاد شده  باعث ایجاد محلول آبی رنگ می­شود. این تغییر رنگ را می توان در دستگاه اسپکتروفتومتر در طول موج های 370 و 650 نانومتر بررسی کرد. دی ایمین ها ترکیبات آلی حاوی دو گروه ایمین (RCH=NR’) هستند. در تحقیقات مختلف از این ترکیبات به عنوان لیگاند و به عنوان پیش ساز هتروسیکل ها استفاده می شود. این واکنش­ها را می توان با افزودن اسید و معرف­های توقف کننده، متوقف کرد.

استفاده از اسید سولفوریک تترا متیل بنزیدین را زرد رنگ کرده و این رنگ ایجاد شده ممکن است در طول موج 450 نانومتر در دستگاه اسپکتروفتومتر قابل بررسی باشد.

نکات تکمیلی

• نگهداری محصول در دمای 2تا8 درجه سانتی گراد
• حساس تر و پایدارتر از رنگ 4-کلرو-1-نفتول
•  تترا متیل بنزیدین توسط نور خورشید و نورهای فلورسنت تخریب می شود بنابراین باید دور از نور مستقیم خورشید نگهداری شود.
• محلولTMB  با اتیل استات مایعی به رنگ سبز مایل به آبی تشکیل می دهد.

مطالب مرتبط

• سوبسترا 3-آمینو-9-اتیل کاربازول (AEC) سیتومتین ژن
• سوبسترا 4-کلرو-1-نفتول (CN) سیتومتین ژن
• سوبسترا تترا متيل بنزيدين (TMB)
• سوبسترا دی آمینو بنزیدین (DAB) سیتومتین ژن