محیط کشت میکروبی TSI که به نام محیط کشت Triple Sugar Iron Agar (تریپل شوگر ایرون اگار) نیز شناخته می‌شود، محیطی انتخابی برای افتراق میان باکتری‌های خانواده انتروباکتریاسه بر اساس توانایی تخمیر قندهای گلوکز، لاکتوز و سوکروز و تولید سولفید هیدروژن می‌باشد محیط کشت تی اس آی به دلیل توانایی میکروارگانیسم‌ها برای تخمیر قند و تولید سولفید هیدروژن استفاده می‌شود. آگار TSI یک محیط مخصوص با قندهای مختلف است که دارای رنگ حساس به pH (فنول قرمز) می‌باشد. تخمیر کربوهیدرات با تولید گاز و تغییر رنگ شاخص pH از قرمز به زرد نشان داده می‌شود. در مورد دکربوکسیلیک اکسیداتیو پپتون، محصولات قلیایی ساخته شده و pH افزایش می‌یابد که با تغییر رنگ محیط از رنگ نارنجی تا قرمز نشان داده می‌شود. تیوسولفات سدیم و سولفات آمونیوم آهن موجود در محیط تولید سولفید هیدروژن را تشخیص داده و با رنگ سیاه در انتها لوله نشان داده می‌شود.

اکثر باکتری‌ها دارای توانایی تخمیر کربوهیدرات‌ها، به‌ویژه قندها هستند. در میان آنها، هر باکتری تنها می‌تواند بخشی از قندها را تخمیر کند، درحالی‌که دیگری نمی‌تواند آن را تخمیر کند؛ بنابراین، قندهایی که یک باکتری می‌تواند باعث تخمیر و یا عدم تخمیر آن شود ویژگی مشخصی از باکتری‌ها را نشان می‌دهد، بنابراین معیار مهمی برای شناسایی آنها است.

آماده‌سازی محیط TSI

• ۶۵ گرم از پودر محیط را در یک لیتر آب مقطر حل کنید. به‌آرامی حرارت دهید تا محیط کاملاً حل شود.
• محیط کشت حرارت دیده را داخل لوله‌های در پیچ‌دار ریخته و در دمای ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه اتوکلاو کنید.
• لوله‌ها را به حالت شیب‌دار (اسلنت) قرار داده و صبر کنید تا محیط ببندد.

شرایط نگهداری محیط تریپل شوگر ایرون اگار

پودر محیط داخل قوطی کاملاً دربسته و در دمای زیر ۳۰ درجه سانتی‌گراد و محیط آماده در دمای ۸-۲ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود. بهترین زمان استفاده تا قبل از تاریخ انقضای درج شده بر روی برچسب محصول است.

فرآیند آزمایش

• محیط کشت TSI را مطابق با دستورالعمل گفته شده در لوله تهیه کنید.
• نمونه موردنظر را به‌صورت سطحی و عمقی در لوله کشت دهید.
• درب لوله‌ها را به‌صورت نیمه‌باز بسته و در دمای ۲±۳۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴-۱۸ ساعت در شرایط هوازی گرماگذاری کنید.

نتیجه و تفسیر محیط کشت TSI

• پس از دوره گرماگذاری، واکنش نمونه‌های مجهول را با سوش‌های استاندارد مقایسه کنید.
• واکنش تخمیر قند در این محیط با زرد شدن رنگ محیط مشخص می‌شود. چنانچه قسمت انتهایی محیط کشت زرد شود (واکنش اسیدی) ولی قسمت شیب‌دار محیط قرمز شود (واکنش بازی)، نشان‌دهنده این است که باکتری فقط قادر به تخمیر گلوکز می‌باشد.
• چنانچه کل محیط کشت در لوله زرد شده باشد به این معنی است که باکتری قادر به تخمیر گلوکز، لاکتوز و یا سوکروز می‌باشد.
• درصورتی‌که کل محیط کشت در صورت قرمزرنگ باقی بماند، نشان‌دهنده وجود باکتری غیرتخمیرکننده قند خواهد بود.
• تولید هیدروژن سولفید در این محیط با سیاه‌رنگ شدن انتهای محیط کشت در لوله نمایان شده و تولید گاز با بالا آمدن محیط کشت و یا ترک خوردن آن مشخص می‌شود.

نکات تکمیلی محیط تریپل شوگر ایرون اگار

• تولید هیدروژن سولفید بر روی محیط Kligler Iron Agar ممکن است نسبت به محیط TSI بهتر قابل تشخیص باشد. تحقیقات نشان داده است که مصرف سوکروز توسط باکتری‌ها در محیط TSI می‌تواند باعث سرکوب شدن واکنش‌های آنزیمی برای تولید هیدروژن سولفید شود. همچنین تمامی گونه‌های سالمونلایی H₂S مثبت قادر به تولید هیدروژن سولفید در محیط TSI نمی‌باشد.
• افزودن سوکروز به محیط کشت TSI برای محدودکردن برخی باکتری‌های تخمیرکننده سوکروز که قادر به تخمیر لاکتوز نمی‌باشند؛ مانند گونه‌های پروتئوس و سیتروباکتر صورت می‌گیرد.
• برای شناسایی قطعی و دقیق‌تر میکروارگانیسم‌ها بایستی تست‌های بیوشیمیایی و تایپینگ های سرولوژیک نیز انجام شود.
• هنگام کشت دادن باکتری بر روی این محیط کشت، نباید از لوپ استفاده شود؛ زیرا در صورت کشت عمقی، آگار ترک‌خورده که باعث ایجاد نتیجه مثبت کاذب برای تولید گاز می‌شود.
• برای کشت باکتری‌ها بایستی از کشت تازه استفاده کرد. در صورت استفاده از کشت‌های مخلوط (چند کلنی)، نتایج غیر قابل اعتمادی به دست می‌آید.
• درب لوله‌ها بایستی نیمه‌باز باشند. در این صورت تبادل هوا به‌خوبی صورت‌گرفته و شرایط واکنش‌های قلیایی بر روی قسمت شیب‌دار مهیاتر می‌شود.

کنترل کیفی محیط کشت Triple Sugar Iron Agar

• ظاهر پودر: پودری و یکنواخت، صورتی رنگ
• ظاهر محیط آماده: قرمزرنگ و کمی کدر
• نتیجه کشت باکتری در شرایط هوازی پس از گرماگذاری در دمای ۲±۳۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴-۱۸ ساعت