محیط کشت محیط کشت VRBA آگارکه به نام محیط کشت Violet Red Bile Agar (ویولت رد بایل آگار) نیز شناخته می شود، محیطی انتخابی برای شناسایی و شمارش کلیفرم­ ها در آب، مواد غذایی و لبنی می باشد.

آماده سازی محیط VRBA 

• ۳۹/۵ گرم از محیط را در ۱ ­لیتر آب مقطر حل کنید.
• حرارت دهید تا بجوشد و کاملا حل شود. محیط را بیشتر از ۲ دقیقه آن حرارت ندهید چون باعث کاهش ویژگی حمایتی آن در رشد می­شود.
• محیط را اتوکلاو نکنید. از حرارت دادن بیش از حد محیط خودداری کنید.
• محیط را تا دمای ۵۰-۴۵ درجه سانتی گراد خنک کنید و بلافاصله استفاده کنید.

شرایط نگهداری محیط کشت VRBA 

پودر محیط داخل قوطی کاملا در بسته و در دمای زیر ۳۰ درجه سانتی گراد و محیط آماده در دمای ۸-۲ درجه سانتی گراد نگهداری شود. بهترین زمان استفاده تا قبل از تاریخ انقضای درج شده بر روی برچسب محصول است.

فرآیند آزمایش

• از این محیط بیشتر در روش پور پلیت استفاده می­ شود. به این طریق که ۱ میلی ­لیتر از نمونه داخل پلیت ریخته می ­شود. سپس ۱۰ میلی­ لیتر از محیطی که جوشانده شده و سپس تا دمای ۵۰-۴۵ درجه سانتی گراد خنک شده به پلیت اضافه می ­شود.
• پلیت را بچرخانید تا نمونه و محیط کشت به خوبی مخلوط شوند. بگذارید آگار محیط به خوبی بسته شود.
• پس از بستن آگار، آن را در دمای ۲±۳۵ درجه سانتی گراد به مدت ۲۴-۱۸ ساعت گرماگذاری کنید. برای محصولات لبنی بهتر است گرماگذاری در دمای ۳۱-۳۰ درجه سانتی گراد انجام شود.

نتیجه و تفسیر

باکتری­ های تخمیرکننده­ لاکتوز (کلیفرم ­ها و E. coli) تشکیل کلنی­ هایی قرمز-ارغوانی، همراه یا بدون مناطق رسوبی قرمز رنگ در اطراف آن می ­دهند.

انتروکوک­ ها و احتمالا Klebsiella، کلنی­ هایی صورتی رنگ با نوک سوزنی ایجاد می­کنند و کلنی مربوط به باکتری­ های لاکتوز منفی بی­­ رنگ خواهد بود. برای شناسایی دقیق نوع باکتری­ کلنی ­های قرمز رنگ باید تست­ های تاییدی انجام شود.

نکات تکمیلی محیط ویولت رد بایل آگار

• می­توان از لایه­ پوششی بر روی محیط بسته شده نیز برای افزایش اختصاصیت محیط کشت استفاده کرد. به این ترتیب که یک لایه از محیط ذوب شده بر روی مخلوط محیط کشت و نمونه که کاملا بسته شده اضافه شود و تا قبل از گرماگذاری کاملا ببندد. در این­صورت دمای گرماگذاری بستگی به نوع میکروارگانیسم هدف خواهد داشت.
• امکان دارد محیط VRBA به طور کامل از رشد میکروارگانیسم ­های گرم مثبت جلوگیری نکند. بنابراین بهتر است از رنگ آمیزی گرم و تست­ های بیوشیمیایی برای شناسایی دقیق کلنی­ های جداسازی شده استفاده شود.
• در محیط کشت VRBA، علاوه بر انتروباکتریاسه، سایر باسیل­های گرم منفی نیز رشد می­ کنند. برای تعیین دقیق گونه و سویه­ باکتری باید از تست­ های بیوشیمیایی استفاده شود.
• پلیت ­های این محیط کشت را بیشتر از ۲۴ ساعت گرماگذاری نکنید چون در این صورت میکروارگانیسم­ هایی که در این مدت قادر به رشد در محیط نبوده ­اند، شروع به رشد خواهند کرد.
• بهترین عملکرد این محیط هنگامی حاصل می­ شود که ظرف مدت ۲۴ ساعت تهیه و استفاده شود.

کنترل کیفی محیط کشت ویولت رد بایل آگار

• ظاهر محیط دهیدراته: بژ-صورتی رنگ ، پودری و یکنواخت
• ظاهر محیط آماده: قرمز-ارغوانی رنگ و کمی کدر
• نتیجه­ کشت باکتری، پس از گرماگذاری در دمای ۱±۳۲ درجه سانتی گراد به مدت ۲۴-۱۸ ساعت