Taq پلیمراز اولین آنزیمی بود که بهعنوان آنزیم پایدار در حرارت ناشی از عملیات PCR (در 95 درجه سانتیگراد برای 40 دقیقه) شناسایی و مورداستفاده قرارگردید.
یکی از مشکلات بسیار مهمی که آنزیم Taq پلیمراز دارد این است که مانند سایر پلیمرازها از خاصیت اگزونوکلئازی اصلاح خطاهای جاگذاری نوکلئوتیدها در جهت ‘3 به ‘5 برخوردار نیست.
اجزا تشکیل دهنده ویال آنزیم TAQ پلیمراز سیناکلون
- 50 میلیمولار کلرید منیزیم و AMS (آمونیوم سولفات) بافر 10X PCR، همراه با SmarTaqDNA پلیمراز.
- بافر 10PCR X، 50 میلیمولار کلرید منیزیم همراه با Taq DNA POLYMERAS
- بافر 10PCR X، حاوی 500 میلیمولار KCI و Tris-HCI(pH 8.4)، بافر AMS حاوی 200 میلیمولار آمونیوم است، Tris-HCI (pH 8.8) 50 میلیمولار کلرید منیزیم در لوله جداگانه عرضه میشود.
کاربرد آنزیم TAQ پلیمراز
- عملیات PCR (قطعات DNA تا 5000bp)
- برچسبگذاری DNA
- توالییابی DNA
- PCR برای شبیهسازی
پایداری حرارتی
10 واحد آنزیم را به مدت 30 دقیقه در دمای 95 درجه سانتیگراد انکوبه کنید و سپس واکنشهای PCR مدنظر را به کمک این آنزیم انجام دهید.
پروتکل پایه PCR
بهطورکلی پروتکل PCR به علت متغیرهای زیر باید توسط اپراتور مدیریت شود.
زمان انکوباسیون، دما، غلظت Taq DNA پلیمراز، پرایمر،2MgCl،الگوهای DNA
اجزای زیر را به میکروتیوب 0.5 میلیلیتری استریل اضافه نمایید.
سنجش عملکردی
آنزیم تک دی ان آ پلیمراز سینا کلون جهت تکثیر بازهای آلی 977 و 788 از دی ان آی ژنومی انسان، ویروسهای دی ان آ دار و تقویت cDNA (ویروسهای RNA)استفاده میشود.
شرایط نگه داری:
- در دمای 20- درجه
مطالب مرتبط
None found
دیدگاهها
هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.