كيت IgM پارس آزمون مناسب چهت اندازه گیری ایمونوگلوبولین M در سرم يا پلاسما با روش ایمونوتوربیدیمتريک می باشد.

کلاس های مختلف ایمونوگلوبولین های انسانی (IgE , IgM , IgA , IgG  وIgD ) گروهی از گلیکوپروتئین های ساختاری و عملکردی هستند.  IgM انسان دارای وزن مولکولی حدود 970 کیلو دالتون می باشد و شامل پنج زنجیره γ است که توسط یک پپتید به یکدیگر اتصال یافته اند. هر یک از واحد های γ شکل شامل دو زنجیره سبک یکسان و دو زنجیره سنگین یکسان است که توسط پیوندهای دی سولفیدی به یکدیگر متصل شده اند.

IgM سرمی توسط B-Cell های پلاسما تولید می شود و حدود  5% از ایمونوگلوبولین های محلول را تشکیل می دهد. عمل اصلی IgM سرم، اتصال به آنتی ژن، وارد کردن مکمل های فعال سازی و آزاد سازی مواد حاصل از کاتابولیسم آنتی ژن می باشد. IgM اولین کلاس از ایمونوگلوبولین ها است که پس از برخورد با آنتی ژن جدید سنتز می گردد.

کاهش غلظت IgM سرم در سندروم های اولیه و ثانویه نقص سیستم ایمنی به وجود می آید. همچنین افزایش از دست دادن پروتئین در نتیجه التهاب های شدید روده نیز می تواند سبب کاهش غلظت IgM گردد. افزایش یکی از کلاس های ایمونوگلوبولین ها که در اثر تومورهای بدخیم مغز استخوان به وجود می آید، نیز ممکن است باعث کاهش ایمونوگلوبولین های کلاس های دیگر از جمله IgM شود.

افزایش غلظت IgM در عفونت های شدید و بیماری های اتوایمن وجود دارد. در اشکال مختلفی از میلوما، مخصوصاً Waldenstrom`s macroglobulinemia مقادیر زیادی از IgM منو کلونال و پلی کلونال تولید می گردد. تعیین مقدار کمی IgM سرم برای تشخیص افتراقی این بیماری ها ضرورت دارد.

روش عملکرد كيت IgM پارس آزمون :

ایمونوتوربیدیمتریک

اساس آزمايش كيت IgM پارس آزمون :

در اين آزمايش غلظت IgM توسط اندازه گیری فتومتریک واکنش بین آنتی بادی های حساس شده بر علیه IgM انسانی موجود در کیت و آنتی ژن IgM موجود در سرم تعیین میگردد.

معرف های موجود در كيت IgM پارس آزمون :

توجه : مقادير زير بر حسب محلول آماده شده  براي كار مي باشد.

شرايط نگهداري محلولهای كيت IgM پارس آزمون : 

محلول ها بايد در دماي 2 تا 8 درجه سانتيگراد نگهداري شوند و تا تاريخ مندرج بر روي ويالها  قابل مصرف مي باشند.

توجه : از فريز و قرارگیری محلول ها در مجاورت نور خودداري کنید.

هشدارها

براي پايداری محلول ها از سديم آزايد استفاده می شود. لذا از بلعیدن و تماس مستقيم محلول ها با دهان و دست و چشم ها خودداري کنید. در صورت تماس بلافاصله با آب فراوان شستشو دهید.

كليه موارد ايمني معمول در آزمايشگاه در هنگام كار با محلول ها رعايت گردد.

بهداشت و ايمني دفع مواد زائد

در مورد چگونگي دور ريز مواد در صورت وجود قوانين مدون طبق قانون موجود عمل شود.

آماده سازي محلولهای كيت IgM پارس آزمون :

محلول های معرف 1 و 2  آماده مصرف هستند.

• تجهيزات معمول آزمايشگاه پزشكي
• سرم فيزيولوژي ( محلول Nacl  با غلظت 9 گرم در ليتر )   

كاليبراتور و كنترلهای كيت IgM پارس آزمون :

جهت كاليبراسیون كاليبراتور  TruCal Protein و جهت كنترل، TruLab Protein شركت پارس آزمون  بطور جداگانه تهيه شود.

روش آماده سازی کالیبراتور، کنترل و نمونه ها :

برای تهیه کالیبراتور ها، ابتدا كاليبراتور TruCal Protein را به نسبت 1+10 با سرم فیزیولوژی رقیق کرده (براي مثال 50 ميکرو ليتر کالیبراتور و 500 میکرو ليتر سرم فیزیولوژی) تا به این وسیله کالیبراتور شماره 6 با غلظت ذکر شده در بروشور TruCal Protein را به دست آورید. سپس طبق شکل زیر از آن سریال رقت تهیه کنید تا به کالیبراتور شماره 2 برسید. از کالیبراتور شماره 2 رقت تهیه شده را به کالیبراتور شماره 1 منتقل نکنید تا به این ترتیب کالیبراتور شماره 1 تنها سرم فیزیولوژی با غلظت صفر باشد. برای تهیه کنترل و نمونه ها، TruLab Protein و کلیه نمونه ها را به نسبت 1+10 با سرم فیزیولوژی رقیق کنید.

نمونه ها :

سرم، پلاسما همراه با EDTA یا هپارين

• 7 روز در دمای 15 تا 25 درجه سانتیگراد
• 3 ماه در دمای 2 تا 8 درجه سانتیگراد
• 6 ماه در دمای منهای 20 درجه سانتیگراد

از آلودگی نمونه ها و فریز مجدد نمونه ها خود داری کنید.

روش انجام آزمايش :

طول موج :             340 نانومتر

قطر كووت :            يك سانتيمتر             

دما :                     37 درجه سانتيگراد

اندازه گيري :         فتومتر با بلانك معرف روي صفر تنظيم شود.

محاسبات :

براي محاسبه تغييرات جذب نوري (ΔA)، جذب نوري اندازه گيري شده در مرحله اول براي هر كووت را از جذب نوري اندازه گيري شده در مرحله دوم كسر نمایيد. سپس تغييرات جذب نوري بدست آمده براي کالیبراتور هاي مختلف را در جدول لگاريتمي وارد نموده و بر اساس منحني بدست آمده غلظت كنترل و نمونه ها را تعيين نمایيد.

ويژگيها و  كارآيي كيت IgM پارس آزمون:

• محدوده اندازه گيري

اين كيت جهت اندازه گيري IgM در محدوده 3 تا 780 ميلي گرم در دسي ليتر طراحي شده و در مواردي كه مقدار IgM بيش از 780 میلي گرم در دسي ليتر باشد بايد نمونه به نسبت 1 بعلاوه 1 با سرم فيزيولوژي رقيق و جواب آزمايش در عدد 2 ضرب شود.

• پدیده منطقه ای

در این آزمایش تا غلظت 8000 میلی گرم در دسی لیتر پدیده منطقه ای مشاهده نشد.

• عوامل مداخله گر

هموگلوبين تا غلظت 1000 ميلي گرم در دسي ليتر، بیلیروبین تا 60 میلی گرم  در دسي ليتر و تري گليسيريد تا غلظت 2000 ميلي گرم در دسي ليتر و RF تا غلظت 1700 واحد بین المللی در میلی ليتر باعث تداخل در آزمايش نمي شوند.

هیچگونه واکنش تقاطعی با IgG و IgA مشاهده نشد.

• حساسيت

حداقل مقدار IgM قابل اندازه گيري 3 ميلي گرم در دسي ليتر مي باشد.

دقت (در 37 درجه سانتيگراد)

دقت بر اساس پروتوکل EP-5 کمیته بین المللی استاندارد های آزمایشگاه های تشخیص طبی (NCCLS)

مقايسه روشها

در مقايسه انجام شده جهت ارزيابي كيت IgM شركت پارس آزمون (Y) با يكي از متداولترين كيت های IgM در جهان (X) بر روي 77 نمونه بيمار نتيجه زير بدست آمد.

Y = 0.93 (X) + 4.23 mg/dl ; r = 0.992