محیط کشت DNase هشت سانت دارواش

مشخصات و ویژگی های محیط کشت DNase هشت سانت دارواش

محیط DNase هشت سانت دارواش مناسب برای تشخیص و افتراق باکتری ها در مواجه با کوکسی گرم مثبت (کاتالاز مثبت) و باسیل گرم منفی استفاده می شود.

اساس آزمایش در محیط کشت DNase :

• این آزمایش با هدف تشخیص باکتری های DNase مثبت در محیط کشت طراحی و تولید گردیده است.
• این محیط در ارزیابی فعالیت دزوکسی ریبونوکلئاز (DNase) باکتری ها و قارچ ها و خصوصا به عنوان کمک در تشخیص استافیلوکوک های بیماری زا به کار می رود.
• DNase Test Agar With Toluiden blue برای کمک به تفکیک و تشخیص گونه سراشیای بدون پیگمان که ممکن است به اشتباه به عنوان گونه انتروباکتر و کلبسیلا تشخیص داده شوند، به کار می رود.
• اگر استافیلوکوک آنزیم DNase داشته باشد این آنزیم، اسید نوکلئیک را هیدرولیز می نماید که با استفاده از معرف و ایجاد هاله شفاف در اطراف محل رشد باکتری می توان به این موضوع پی برد.

ویژگی های آزمایش:

• حساسیت: 99% استافیلوکوک های کواگولاز مثبت، DNase مثبت نیز هستند.
• اختصاصیت: 20% استافیلوکوک های کواگولاز منفی، DNase مثبت هستند.
  محیط مناسب برای برداشتن کلنی، پلیت های LEMB Agar یا Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood حاوی ارگانیسم مورد نظر می باشد.
  از پلیت بلاد آگار برای استافیلوکوک ها و بلاد آگار یا مک کانکی برای نمونه های گرم منفی استفاده میشود.

تجهیزات و مواد مورد نیاز محیط کشت DNase :

1. معرف اسید کلریدریک یک نرمال یا معرف تولوئیدین بلو
2. محیط کشت DNase دارواش

پروتکل محیط کشت DNase دارواش:

پلیت های DNase Test Agar یا DNase Agar with Toluidine Blue را با نمونه مورد نظر به صورت نقطه ای (یا خطی) تلقیح نمایید.
پلیت ها را به مدت ۲۴-۱۸ ساعت در دمای ۲ + ۳۵ سانتی گراد انکوبه نمایید.
پس از انکوباسیون، روی پلیت های DNase Test Agar ساده، اسید کلریدریک ۱ نرمال و یا تولوئیدین بلو
۰.۱٪ بریزید به گونه ای که سطح پلیت را کاملا بپوشاند و سپس آن را بر روی زمینه تیره قرار داده و بررسی نمایید.
تلقیح باید نقطه ای باشد، چون بعضی از سویه های استافیلوکوک اورئوس به خوبی بر روی محیط، رشد نمی کنند و در نتیجه میزان رشد برای ارزیابی فعالیت DNase کافی نخواهد بود. در صورت تلقیح نقطه ای، حتی اگر در محل تلقیح، رشدی ایجاد نشود می توان فعالیت DNase را ارزیابی نمود.

تفسیر نتیجه:

DNase Test Agar که اسید کلریدریک یک نرمال روی آن ریخته شده است:
الف) نتیجه مثبت : فورا هاله های شفاف کاملا مشخصی اطراف کلنی یا محل تلقیح را در محیط کشت احاطه می کنند.
ب) نتیجه منفی : اطراف کلنی ها یا محل تلقیح شفاف نمی شود.