کیت Real Time PCR برای تشخیص جهش Jak2 V617F

محتویات کیت جهش Jak2 V617F:

• مستر میکس Real time :

پرایمر، پروب ، 50 میلی مولار Mgcl2 ، Taq پلی مراز، 10 میلی مولار dNTP ، بافر با آب

• کنترل مثبت
• کنترل منفی

مخلوط آماده سازی :

• 10 میکرولیتر مستر میکس Real time را به هر میکروتیوب اضافه کنید.
• 5 میکرولیتر DNA ویروسی ، کنترل مثبت و کنترل منفی به هر میکروتیوب بیافزایید، به مدت 10 ثانیه مخلوط و اسپین نمایید، برای ارزیابی کپی نامبر ویروس در نمونه خود ، 2 تا serial dilutions ساخته و آن را برای فرآیند Real- time PCR خود تعریف کنید.

برنامه PCR :

دناتوراسیون آغازی : 95 درجه سانتی گراد به مدت 5 دقیقه: در این مرحله Taq پلی مراز فعال شده و DNA ویروسی دناتوره می شود.

40 سیکل : 95 درجه سانتی گراد به مدت 15 ثانیه ،56 درجه سانتی گراد به مدت 10 ثانیه، 72 درجه سانتی گراد به مدت 30 ثانیه

آشکار سازی فلورسنت: در green (FAM) channel و در72 درجه سانتی گراد.

آنالیز Real-time  :

اگر بعد از38  سیکل نمونه مثبت بود، آزمایش باید دوباره انجام شود.

نکاتی راجع به جهش Jak2 V617F  :

ژن JAK2 عضوی از خانواده Janus کینازها می باشد. در دو نفر از افراد مبتلا به PV  وجود جهش در JAK2 V617F تایید شده است به این صورت که فعالیت اتوماتیک مهار کننده JAK2 در حضور موتاسیون V617F از بین رفته بود. اختلال در تیروزین کیناز کلیدی در بیماری زایی بسیاری از سرطان ها مهم است ، از جمله CML.

مشاهده سایر محصولات مرتبط