یکی از محصولات تجزیه هموگلوبین، بيلي روبين است. بیلی روبین غیر کونژوگه آزاد شدیداً غیر قطبی و نامحلول در آب است. بنابراین برای انتقال از طحال به پانکراس از طریق خون،  با آلبومین تشکیل یک کمپلکس می دهد. بيلي روبين در كبد به اسيد گلوكرونيك متصل شده و به بیلی روبین گلوکورونیک اسید تبدیل می شود و به صورت محلول در آب از طریق مجاری صفراوی دفع می گردد.

افزایش بیلی روبین در نتیجه افزایش تولید آن در اثر همولیز ( یرقان پیش کبدی ) ، آسیب پارانشیم کبدی ( یرقان میان کبدی ) و انسداد مجاری صفراوی ( یرقان پس کبدی ) مشاهده می شود. همچنین افزایش بیلی روبین به صورت مزمن و ارثی، سندرم گيلبرت ناميده مي شود که نسبتاً رايج است.

در 60 تا 70 درصد نوزادان به دليل تخریب گلبول های قرمز و تأخیر عملکرد آنزیم ها در تجزیه بیلی روبین حاصل از آن، سطح بيلي روبین افزایش می یابد.

روش هاي معمول اندازه گيري بيلي روبين، مقدار بيلي روبين توتال و بيلي روبين مستقيم را نشان مي دهد که بيلي روبين مستقيم در واقع اندازه گيري ميزان بيلي روبين كونژوگه و محلول در آب است. ميزان بيلي روبين غيركونژوگه را می توان از تفاوت ميزان بيلي روبين توتال و مستقيم تعيين نمود.

روش عملکرد کیت بیلیروبین دایرکت پارس آزمون :

فتومتریک با استفاده از 2 و 4 دی کلرو آنیلین ( DCA )

اساس آزمايش در کیت بیلیروبین دایرکت پارس آزمون:

در اين آزمايش بيلي روبين مستقيم در حضور دیازو 2 و 4 دي كلرو آنيلين تشكيل يك ترکیب ازتی قرمز رنگ در محیط اسیدی مي دهد. شدت رنگ ایجاد شده كه به صورت فتومتريک قابل انداره گيري است  با مقدار بیلی روبین رابطه مستقيم دارد.

معرفهای موجود در کیت بیلیروبین دایرکت پارس آزمون :

محتويات و مقادير

توجه : مقادير زير بر حسب محلول آماده شده  براي كار مي باشد.

معرف شماره 1 :

معرف شماره 2 :

شرايط نگهداري محلولهای کیت بیلیروبین دایرکت پارس آزمون :

محلول ها بايد در دماي 2 تا 8 درجه سانتيگراد نگهداري شوند و تا تاريخ مندرج بر روي ويالها  قابل مصرف مي باشند. محلول شماره 2 نسبت به نور بسیار حساس است.

توجه : از فريز نمودن و قراردادن محلول ها در مجاورت نور خودداري شود.

هشدارها

از بلعیدن و تماس مستقيم محلول ها با دهان و دست و چشم ها خودداري شود و در صورت تماس  بلافاصله با آب فراوان شستشو داده شود.

بطور كلي كليه موارد ايمني معمول در آزمايشگاه در هنگام كار با محلول ها رعايت گردد.

بهداشت و ايمني دفع مواد زائد

در مورد چگونگي دور ريز مواد در صورت وجود قوانين تدوين شده طبق قانون موجود عمل شود.

آماده سازي محلولها :

محلول های معرف 1 و 2  به صورت آماده مصرف می باشند.

لوازم و مواد مورد نياز کیت بیلیروبین دایرکت پارس آزمون :

تجهيزات معمول آزمايشگاه پزشكي

سرم فيزيولوژي ( محلول Nacl با غلظت 9 گرم در ليتر )

كاليبراتور و كنترلهای کیت بیلیروبین دایرکت پارس آزمون :

جهت كاليبراسیون، كاليبراتور TruCal U و جهت كنترل، TruLab N و TruLab P  شركت پارس آزمون  بطور جداگانه تهيه شود.

نمونه ها :

سرم، پلاسما همراه با هپارين

پايداري بیلی روبین مستقیم در سرم يا پلاسما :

در دماي 15 تا 25 درجه سانتيگراد 2 روز

در دماي 2 تا 8 درجه سانتيگراد 7 روز

در دماي منهاي 20 درجه سانتيگراد 3 ماه (در صورتیکه بلا فاصله فریز گردد)

از آلوده شدن نمونه ها و قرار گرفتن آنها در مقابل نور جداً خود داری شود.

 روش انجام آزمايش :

طول موج :             546 نانومتر ( 540 تا 560 نانومتر )

قطر كووت :          يك سانتيمتر

دما :                   20 تا 25 و یا 37 درجه سانتيگراد

اندازه گيري :       فتومتر با بلانك معرف روي صفر تنظيم شود

ويژگيها و  كارآيي كيت بیلیروبین دایرکت پارس آزمون :

• محدوده اندازه گيري

اين كيت جهت اندازه گيري بیلی روبین مستقیم در محدوده 1/0 تا 10 ميلي گرم در دسي ليتر طراحي شده و در مواردي كه مقدار بیلی روبین مستقیم بيش از 10 میلي گرم در دسي ليتر باشد بايد نمونه به نسبت 1 بعلاوه 1 با سرم فيزيولوژي رقيق و جواب آزمايش در عدد 2 ضرب شود.

• عوامل مداخله گر

اسيد آسكوربيك تا غلظت 30 ميلي گرم در دسي ليتر، هموگلوبين تا غلظت 49 ميلي گرم در دسي ليتر و تري گليسيريد تا غلظت 1000 ميلي گرم در دسي ليتر باعث تداخل در آزمايش نمي شوند.

مقايسه روشها

در مقايسه انجام شده جهت ارزيابي كيت بیلی روبین مستقیم  شركت پارس آزمون(Y)   با يكي از متداول ترين كيت هاي بیلی روبین مستقیم در جهان (X)  بر روي 85 نمونه بيمار نتيجه زير بدست آمد.

Y = 0.95 (X) + 0.04 mg/dl ; r = 0.995

دامنه مرجع :

کودکان و بزرگسالان

≤ 0.3   mg/dl