رنگ آمیزی اندوسپورها – قسمت دوم

در سال 1922 ، دورنر روشی را برای رنگ آمیزی اندوسپور ها منتشر کرد. شفر و فولتون روش Dorner را در سال 1933 اصلاح کردند تا روند سریعتر شود. رنگ آمیزی اندوسپور یک روش افتراقی است که به طور انتخابی آندوسپورهای باکتریایی را رنگ می کند. هدف اصلی از رنگ آمیزی آندوسپور ، تمایز اسپورهای باکتریایی از سلولهای رویشی دیگر و تمایز تشکیل دهنده اسپور از سازندگان غیر اسپور است.

آندوسپورهای باکتریایی از نظر متابولیکی غیر فعال، ساختارهای بسیار مقاوم هستند که توسط برخی باکتری ها به عنوان یک استراتژی دفاعی در برابر شرایط نامساعد محیطی تولید می شوند. باکتریها می توانند در این حالت معلق باقی بمانند تا زمانی که شرایط مساعد شود و بتوانند جوانه بزنند و به حالت رویشی خود برگردند.

در روش Schaeffer-Fulton`s ، با بخار دادن امولسیون باکتری، یک رنگ سبز-مالاکیتی وارد اسپور می شود. سبز مالاکیت محلول در آب است و میل کمی به مواد سلولی دارد، بنابراین سلولهای رویشی ممکن است با آب رنگ زدایی شوند. سپس سافرانین برای جلوگیری از رنگ آمیزی هر سلول که از رنگ آن خارج شده استفاده می شود. در پایان فرایند رنگ آمیزی ، سلولهای رویشی صورتی رنگ و اندوسپورها سبز تیره خواهند بود.

اسپورها ممکن است در وسط سلول، در انتهای سلول یا بین انتها و وسط سلول قرار داشته باشند. شکل اسپور نیز ممکن است از نظر تشخیصی استفاده شود. اسپورها ممکن است کروی یا بیضوی باشند.

مواد لازم در رنگ آمیزی اندوسپور:

  • رنگ Carbolfuchsin
  • 0.3 گرم فوچین بازی
  • 10 میلی لیتر اتانول ، 95٪ (حجم / حجم)
  • 5 میلی لیتر فنل ، بلورهای ذوب شده با حرارت
  • 95 میلی لیتر آب مقطر
  • فوکسین بازی را در اتانول حل کنید. سپس فنل محلول در آب را اضافه کنید.
  • مخلوط کنید و بگذارید چند روز بماند. قبل از استفاده فیلتر کنید.

حلال رنگ زدایی (اسید-الکل)

  • 97 میلی لیتر اتانول ، 95٪ (حجم / حجم)
  • 3 میلی لیتر اسید کلریدریک (غلیظ)

رنگ بر (محلول نیگروسین)

10 گرم نیگروسین

100 میلی لیتر آب مقطر

روش رنگ آمیزی اندوسپورها

  •      یک اسلاید بدون چربی پاک کنید و در حالت استریل اسمیر تهیه کنید و خشک کنید.
  •      اسمیر را با استفاده از حرارت ثابت كرده و با یك مربع كاغذ بلات یا برش حوله ای متناسب لام را بپوشانید.
  •      کاغذ بلات را به مدت 5 تا 10 دقیقه با carbolfuchsin و بخار اشباع کنید ، کاغذ را مرطوب نگه دارید و در صورت لزوم رنگ بیشتری اضافه کنید. متناوباً ، ممکن است اسلایدها را روی یک ظرف آب جوش بخارپز کنید.
  •      کاغذ بلات را برداشته و به مدت 1 دقیقه فیلم را با اسید-الکل رنگ آمیزی کنید. با آب شیر بشویید و خشک کنید.
  •      یک قطره نیگروزین را در یک سر اسلاید بریزید و با کمک اسلاید دیگر ، یک لایه نازک از یک رنگ در سراسر اسمیر ایجاد کنید.
  •      اجازه دهید فیلم Nigrosin در هوا خشک شود.
  •      پس از خشک شدن، اسلاید را در حالت غوطه وری روغن مشاهده کنید.
  • سلولهای رویشی بی رنگ ، اندوسپورها قرمز و زمینه سیاه است.

نمونه هایی از رنگ آمیزی اندوسپور

  • مثبت

Clostridium perfringens ، C. botulinum ، C. tetani ، Bacillus anthracis ، Bacillus cereus ، Desulfotomaculum spp ، Sporolactobacillus spp ، Sporosarcina spp و …

  • منفی

  1. coli ، Salmonella spp و غیره

کنترل کیفیت رنگ آمیزی Endospore

  • کنترل مثبت: Clostridium perfringens (ATCC 13124)
  • کنترل منفی: اشریشیا کلی (ATCC 25922)

لینک های مفید

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد.