محیط کشت نمک صفراوی – Bile Salts

محیط کشت نمک های صفراوی که به نام محیط کشت Bile Salts Mixture شناخته میشود که مناسب کشت میکروارگانیسم ها می باشد. نمک صفراوی مخلوطی از اسیدهای صفراوی کونژوگه طبیعی هستند که به­ عنوان عامل مهارکننده انتخابی در محیط ­های میکروبیولوژیکی استفاده می ­شود. اکس­ بایل برای محیط­ هایی مانند مکانکی ­براث و آگار، Brilliant Green Bile Broth و EE Broth استفاده می­ شود.

محیط کشت میکروبی Bile Salts Mixture #3 یا Bile salts mixture NO.3 مخلوطی از نمکهای Bile می باشد که برای آماده سازی محیط های کشت میکروبی در تنظیمات آزمایشگاهی به کار می رود. این ماده برای کارهای تشخیصی بیماری های انسانی کاربرد ندارد. Bile Salts Mixture No. 3 مخلوطی از نمک های سدیم کولات و سدیم دئوکسی کولات است. قبلا از این ماده به عنوان عامل انتخابی برای میکروارگانیسم های گرم منفی و به عنوان عامل بازدارنده کوکسی های گرم مثبت استفاده می شد. این ماده به طور اختصاصی برای استفاده در MacConkey Agar و Violet Red Bile Agarآماده سازی می شود. Bile Salts Mixture No. 3 در آب مقط یا در آب دیونیزه محلول می باشد و از نظر PH نیز حالت خنثی کمی بازی دارد و این ماده بدون هیچ پیش فیلتراسیونی در آماده سازی محیط های کشت به کار می رود.

ترکیبات محیط کشت نمک های صفراوی

نمک های صفراوی شامل؛ نمک­ های صفرای شماره 3 (Bile salts No. 3)، اکس بایل (Ox Bile)، سدیم داکسی کولات (Sodium deoxycholate)، سدیم کولات (Sodium Cholate)، سدیم توروداکسی کولات (Sodium taurodeoxycholate) و سدیم توروکولات (Sodium taurocholate) می­ باشند.

نمک های صفراوی شماره 3، مخلوطی از دو نمک سدیم­ کولات و سدیم داکسی­ کولات می­ باشد که به­ منظور کاربردهای میکروبیولوژی تهیه شده­ اند.

طرز تهیه کلی محیط های کشت 

همانطوریکه می دانید محیطهای کشت به سه دسته جامد ، نیمه جامد ، مایع تقسیم می شوند . محیطهای مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است . مثلاً حدود ( ۲/۰%) و محیط های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم وبالاخره محیط های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .

برای ساختن محیط های کشت باکتری، ما از پودر مخصوص که در شیشه های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌ کنیم. در روی این شیشه ها ترکیب محیط بطور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است . مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده ودر مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته اید اضافی نموده و آنرا کاملاً‌ حل نمائید وسپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید ، تا زمان جوشیدن آنرا چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و بمدت یک دقیقه بجوشد پس از آنکه مایع بجوش آمد ، آنرا برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید وظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود . بعد از استریل کردن بگذارید تا خنک شود تا حدود c45⁰– 40 . سپس در حالیکه ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آنرا با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید ، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید وبعد درون پلیت های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید . بعد پلیت ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند وازتکان دادن آن خودداری نمائید وپس از جامد شدن محیطهای کشت نوترینت آگار را جمع کرده ودر c37⁰ بمدت ۲۴ ساعت قرار دهید . اگر محیط ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون آورده و در یخچال ۴ درجه سانتی گراد قرار می‌دهید .

طرز ساختن سایر محیطهای کشت، همینطور می‌باشد منتهی بعضی از محیطهای جامد در لوله مستقیم، پس از جوشاندن ریخته شده و بعد استریل می‌شوند که این محیطها را پس از استریل شدن، به طور ایستاده می‌گذاریم مثل محیط SIM و یا کج می‌گذاریم مثل محیط TSI تا سرد شوند .

برای ساختن محیط مایع (براث) پس از جوشاندن، محیط را در لوله‌ ها تقسیم می‌کنیم و سپس با پنبه‌ای درب آنها را مسدود کرده و جهت استریل داخل اتوکلاو قرار می‌دهیم .