مهارکننده پروتئین گلژی پلاگ – BrefeldinA

محلول Golgi Plug (BrefeldinA) که به نام مهارکننده انتقال پروتئین نیز شناخته می شود، مناسب برای متوقف کننده ترانسپورت داخلی میباشد. GolgiPlug، یک مهارکننده انتقال پروتئین حاوی برفلدین A می باشد که به سلول‌های لنفاوی تحریک‌شده in vitro یا in vivo افزوده می شود.  با اضافه کردن محلول، فرآیندهای انتقال پروتئین درون سلولی آنها مسدود شده و منجر به تجمع سیتوکین ها و یا پروتئین ها در مجموعه گلژی می شود. این افزایش تجمع سیتوکین ها در سلول، قابلیت تشخیص سلول های تولید کننده سیتوکین را با رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس و آنالیز فلوسایتومتری افزایش می دهد.

برفلدین A (BFA) چیست؟

Brefeldin A یک ضدویروس لاکتون است که توسط قارچ Penicillium brefeldianum تولید می‌شود. برفلدین A با جلوگیری از ارتباط پوشش COP-I  به غشای گلژی، انتقال پروتئین را از شبکه آندوپلاسمی به کمپلکس گلژی به طور غیرمستقیم مهار می‌کند.

BFA یک مهارکننده انتقال پروتئین است که معمولاً برای تقویت سیگنال‌های رنگ‌آمیزی سیتوکین درون‌سلولی با مسدودکردن فرایندهای انتقال در طول فعال‌سازی سلول استفاده می‌شود.

آیا می‌توان  GolgiPlug جایگزین کرد؟

به‌عنوان جایگزینی برای GolgiPlug، محققان ممکن است بخواهند از GolgiStop، یک مهارکننده انتقال پروتئین حاوی موننسین استفاده کنند.

مشخص شده که GolgiPlug و GolgiStop اثرات متفاوتی بر روی رنگ‌آمیزی سیتوکین درون‌سلولی دارند که وابسته به زمان، فعال‌کننده و سیتوکین می‌باشد. این عوامل باید هنگام انجام رنگ‌آمیزی سیتوکین داخل سلولی در نظر گرفته شوند.

کاربرد

زمانی که این محصول به محیط کشت افزوده شود با مسدودکردن فرایندهای انتقال پروتئین درون‌سلولی سلول‌های لنفاوی تحریک‌شده in vitro یا in vivo باعث ایجاد تجمعی از سیتوکین‌ها و یا پروتئین‌ها در مجموعه گلژی می‌شود. در نتیجه با افزایش قابلیت تشخیص سلول‌های تولیدکننده سیتوکین با رنگ‌آمیزی ایمونوفلورسانس و آنالیز فلوسایتومتری همراه است.

روش استفاده از  GolgiPlug

به‌ازای هر 1 میلی‌لیتر کشت سلولی 1 میکرولیتر  GolgiPlug اضافه و آن را کاملاً مخلوط کنید. حدود  4 تا 6 ساعت  به سلول‌های تحریک شده با  GolgiPlug استراحت داده تا عملکرد موردنظر ما صورت گیرد.

به طور قابل‌توجهی توانایی تشخیص سلول‌های تولیدکننده سیتوکین را با رنگ‌آمیزی ایمونوفلورسانس افزایش می‌دهد.

نکات تکمیلی

• محلول رقیق نشده در دمای 4 درجه سانتی‌گراد نگهداری شود.
• توصیه می‌شود  GolgiPlug بیش از 12 ساعت در کشت سلولی نگهداری نشود.