توضیحات

آنزیم محدودکننده یا اندونوکلئاز محدودکننده پروتئینی است که یک توالی نوکلئوتیدی خاص و کوتاه را تشخیص می‌دهد سپس DNA را در همان قسمت برش می‌دهد که به‌عنوان توالی هدف شناخته می‌شود. آنزیم‌ MlsI /MscI جایگاه های TGG^CCA را تشخیص و در دمای 37 درجه سانتی‌گراد با بافر R (ایزواسکیزومرها: BalI، MluNI، MscI، Msp20I) DNA را برش می‌دهد.

کاربرد و انواع آنزیم‌های محدودکننده MlsI / MscI

• نوع I (شکاف در توالی‌های دور از یک توالی هدف)
•  نوع II (شکاف در داخل یا در فواصل خاص کوتاه از یک توالی هدف)
•  نوع III (شکاف در مکان‌هایی بافاصله کوتاه از یک توالی هدف)
• نوع IV (مکان شناسایی  و نوع DNA اصلاح شده با متیله، هیدروکسی متیله و گلوکوزید هیدروکسی متیله شده را هدف قرار می‌دهد).

نکات تکمیلی

• رایج‌ترین چالش‌های مربوط به هضم محدود عبارتند از: 1. غیرفعال‌شدن آنزیم، 2. هضم ناقص یا بدون هضم، و 3. برش غیرمنتظره.
• آنزیم باید همیشه در دمای 20- درجه سانتیگراد نگهداری شده و برای حفظ فعالیت بهینه باید از چرخه‌های متعدد انجماد و ذوب خودداری شود.
• برای هضم کامل، اطمینان حاصل کنید که حجم آنزیم 1 به 10 حجم کل واکنش باشد.
• زمان کل واکنش به طور مناسب بر اساس مقدار DNA قابل هضم محاسبه شده.
• از بافرهای مناسب باید برای اطمینان از حداکثر فعالیت آنزیمی استفاده شود و در صورت هضم مضاعف، مطمئن شوید که دو محل محدودیت به‌اندازه کافی فاصله دارند تا فعالیت یک آنزیم نتواند با فعالیت آنزیم دیگر تداخل پیدا کند.
• این محصول فقط برای استفاده تحقیقاتی می‌باشد و کاربردی در روش‌های تشخیصی ندارد.

مطالب مرتبط

None found